Etablering av Sebrafisk knock-out linjer for å studere apetitt, fordøyelse og sansing av næringskomponenter.

Bruken av planteingredienser i laksefôrindustrien har økt betraktelig, og dette gir ofte suboptimal vekst i oppdrett. Man forklarer gjerne den reduserte veksten med redusert appetitt og fôrinntak, samt at planteingrediensene er vanskeligere å fordøye. Det er derfor viktig å avdekke de fysiologiske mekanismer involvert i regulering av appetitt og fordøyelse, og hvordan dette er knyttet til sansing av næringskomponenter. Dette komplekse regulatoriske samspillet mellom sansing av næringskomponenter, fordøyelse og appetitt er regulert av hormoner/neuropeptider som cholecystokinin (CCK) og leptin. Vi har tidligere utført studier av disse genene/hormonene og avdekket deres sentrale rolle. Nå når nye genomredigeringsteknikker er blitt tilgjengelige ønsker vi å benytte CRISPR teknikken for å beskrive deres in vivo regulatoriske funksjon ved hjelp av funksjonelle studier inkludert fôringsforsøk. Kunnskapen kan ikke fremkomme i cellestudier, da forståelse av denne multi-organprosessen krever bruk av funksjonelle in vivo studier med bl.a intakt tarm-hjerneakse.
Vi vil slå ut reseptorene for hormonene, for å blokkere for deres effekt. Spesifikt gjelder dette LepR, CCK1R, CCK2R1, CCK2R2, CCK2R1+2R2, CCK1R+2R1+2R2. De to siste er di- og triple- knockout for slå ut alle reseptorene for CCK samtidig. Dette vil gi detaljert kunnskap om hormonenes rolle i det fysiologiske samspillet som regulerer appetitt og fordøyelse.

For å kunne identifisere de transgene fisk der genet er slått ut, vil vi være avhengige av haleklipping etterfulgt av DNA ekstraksjon og PCR analyse.
Fenotypisk karakterisering av den transgene fisken vil inkludere studier av fôrinntak, fordøyelighet, vekst, metabolisme (respirasjon), genutrykk (qPCR og RNASeq), og allokering (kjemisk analyse; protein, fett).