Etablering av en bakteriemi-modell i rotte for å studere effekt av potensiell ny antibiotika gitt intravenøst
FORMÅL: Formålet med studiet er å etablere en bakteriemi-modell i rotte for å studere effekten av en potensielt ny antibiotika og om denne er lovende for intravenøs behandling av systemisk infeksjoner.
SKADEVIRKNINGER
Dyr vil bli bedøvet under injeksjoner, og vil få smertelindring med metacam samtidig med bakterieinjeksjon, men vil antakelig oppleve moderat smerte i løpet av forsøket som konsekvens av alvorlig systemisk infeksjon. Dyr vil derfor bli tett oppfulgt og avlivet ved humane endepunkt som bestemt av scoreskjema. Forsøket vurderes som mulig betydelig belastende for de første rottene på bakgrunn av at modellen ikke er etablert, og at det derfor er vanskelig å garantere at selv-død unngås. Vi vil vurdere om antihistaminer kan redusere lokal toksisitet av peptid og forenkle haleinjeksjoner.
FORVENTET NYTTEVERDI
Antibiotikaresistens er et økende problem og en stor global trussel. Det er et stort behov for nye effektive antibiotika med nye virkningsmekanismer. Vi har utviklet et peptid som kan være en ny potensiell antibiotika. Peptidet har vist lovende resultater i in vitro studier og i dyremodeller hvor medisinen ble gitt lokalt (i sement i beinimplantat og utvortes krem til behandling av hudinfeksjon). Om dette peptidet også har potensiale til å kunne brukes intravenøst til å behandle infeksjoner er viktig for å kunne velge indikasjon og for å utvikle denne mulige nye antibiotikaen videre.
ANTALL DYR OG ART
Studiet vil benytte Wistar rotter som er brukt i en lignende bakteriemi-modell, og som anses som en velegnet modell for å studere infeksjonssykdommer.
Totalt søkes det om opp til 31 dyr for E.coli bakteriemi modell. 4 dyr til trening, 12 + 3 dyr til å bestemme E.coli bakteriedose som gir tilstrekkelig infeksjon (6 dyr pr dose, 2-3 doser) og 12 dyr til å evaluere effekt av behandling (6 dyr pr behandling, 2 behandlinger (negativ kontroll med saltvann, og behandling med peptid) etter E.coli infeksjon.
Studiet vil også bli gjentatt med S.aureus infeksjon. Til dette søkes det om opp til 38 dyr: Inntil 7 dyr for å evaluere om stikkpiller rektalt kan være en tilsvarende god administrasjonsrute som intravenøst, 12 dyr til å bestemme minimum dødelig dose av S.aureus, og 19 dyr til å evaluere effekt av behandling (vancomycin kontroll (n=4), vehicle (n=6), peptid (n=9, 6 til overlevelse, samt 3 dyr behandlet med peptid som tas ut samtidig som kontrollgruppe termineres for å se på bakterie i vev)
Totalt for E.coli og S.aureus bakteriemi modellene søkes det om 31+38=69 dyr
ETTERLEVELSE AV 3R
Refinement: God tid til håndtering og tilvenning av rotter, ønsker også prøve "rat tickling". Bedøvelse vil gis under prosedyrer, og dyrene vil følges tett opp under hele forsøket. Gir støttebehandling i form av metacam og saltvann subkutant etter infisering.
Reduction: Redusert antall dyr til minimum nødvendig for å kunne få tilstrekkelig informasjon til en overlevelseskurve og kunne evaluere forskjell mellom behandling med og uten medisin. Gjør kun to ulike bakteriekonsentrasjoner basert på eksisterende litteratur for å finne korrekt infeksjonsgrad til å evaluere effekt av medisin. Avventer å inkludere en enda høyere bakteriekonsentrasjon til vi har resultat fra de første to doser, og gjør kun en enda høyere bakteriekonsentrasjon dersom det er nødvendig for å oppnå tilstrekkelig infeksjonsgrad. For å redusere antall dyr, kan rotter brukes til flere formål der det er mulig.
Replacement: Dyreforsøk er eneste mulighet til å kunne bevise behandlingseffektivitet av peptidet i systemisk infeksjon in vivo. Vi har gjort grundige in vitro forsøk for å vise effekt i fullblod ved ulike bakteriekonsentrasjoner, for å øke sannsynligheten for å treffe vinduet i forhold til bakteriekonsentrasjon og behandlingskonsentrasjon i dyreforsøk så ikke mange dyr må brukes for å optimalisere modell. Eksisterende litteratur erstatter deler av optimalisering nødvendig for å etablere modell, siden lignende forsøk er gjort med andre bakteriestammer og et lignende peptid er brukt for intravenøs behandling av kreft i rotte.
SKADEVIRKNINGER
Dyr vil bli bedøvet under injeksjoner, og vil få smertelindring med metacam samtidig med bakterieinjeksjon, men vil antakelig oppleve moderat smerte i løpet av forsøket som konsekvens av alvorlig systemisk infeksjon. Dyr vil derfor bli tett oppfulgt og avlivet ved humane endepunkt som bestemt av scoreskjema. Forsøket vurderes som mulig betydelig belastende for de første rottene på bakgrunn av at modellen ikke er etablert, og at det derfor er vanskelig å garantere at selv-død unngås. Vi vil vurdere om antihistaminer kan redusere lokal toksisitet av peptid og forenkle haleinjeksjoner.
FORVENTET NYTTEVERDI
Antibiotikaresistens er et økende problem og en stor global trussel. Det er et stort behov for nye effektive antibiotika med nye virkningsmekanismer. Vi har utviklet et peptid som kan være en ny potensiell antibiotika. Peptidet har vist lovende resultater i in vitro studier og i dyremodeller hvor medisinen ble gitt lokalt (i sement i beinimplantat og utvortes krem til behandling av hudinfeksjon). Om dette peptidet også har potensiale til å kunne brukes intravenøst til å behandle infeksjoner er viktig for å kunne velge indikasjon og for å utvikle denne mulige nye antibiotikaen videre.
ANTALL DYR OG ART
Studiet vil benytte Wistar rotter som er brukt i en lignende bakteriemi-modell, og som anses som en velegnet modell for å studere infeksjonssykdommer.
Totalt søkes det om opp til 31 dyr for E.coli bakteriemi modell. 4 dyr til trening, 12 + 3 dyr til å bestemme E.coli bakteriedose som gir tilstrekkelig infeksjon (6 dyr pr dose, 2-3 doser) og 12 dyr til å evaluere effekt av behandling (6 dyr pr behandling, 2 behandlinger (negativ kontroll med saltvann, og behandling med peptid) etter E.coli infeksjon.
Studiet vil også bli gjentatt med S.aureus infeksjon. Til dette søkes det om opp til 38 dyr: Inntil 7 dyr for å evaluere om stikkpiller rektalt kan være en tilsvarende god administrasjonsrute som intravenøst, 12 dyr til å bestemme minimum dødelig dose av S.aureus, og 19 dyr til å evaluere effekt av behandling (vancomycin kontroll (n=4), vehicle (n=6), peptid (n=9, 6 til overlevelse, samt 3 dyr behandlet med peptid som tas ut samtidig som kontrollgruppe termineres for å se på bakterie i vev)
Totalt for E.coli og S.aureus bakteriemi modellene søkes det om 31+38=69 dyr
ETTERLEVELSE AV 3R
Refinement: God tid til håndtering og tilvenning av rotter, ønsker også prøve "rat tickling". Bedøvelse vil gis under prosedyrer, og dyrene vil følges tett opp under hele forsøket. Gir støttebehandling i form av metacam og saltvann subkutant etter infisering.
Reduction: Redusert antall dyr til minimum nødvendig for å kunne få tilstrekkelig informasjon til en overlevelseskurve og kunne evaluere forskjell mellom behandling med og uten medisin. Gjør kun to ulike bakteriekonsentrasjoner basert på eksisterende litteratur for å finne korrekt infeksjonsgrad til å evaluere effekt av medisin. Avventer å inkludere en enda høyere bakteriekonsentrasjon til vi har resultat fra de første to doser, og gjør kun en enda høyere bakteriekonsentrasjon dersom det er nødvendig for å oppnå tilstrekkelig infeksjonsgrad. For å redusere antall dyr, kan rotter brukes til flere formål der det er mulig.
Replacement: Dyreforsøk er eneste mulighet til å kunne bevise behandlingseffektivitet av peptidet i systemisk infeksjon in vivo. Vi har gjort grundige in vitro forsøk for å vise effekt i fullblod ved ulike bakteriekonsentrasjoner, for å øke sannsynligheten for å treffe vinduet i forhold til bakteriekonsentrasjon og behandlingskonsentrasjon i dyreforsøk så ikke mange dyr må brukes for å optimalisere modell. Eksisterende litteratur erstatter deler av optimalisering nødvendig for å etablere modell, siden lignende forsøk er gjort med andre bakteriestammer og et lignende peptid er brukt for intravenøs behandling av kreft i rotte.