Fotokjemisk internalisering (PCI) av mRNA-baserte vaksiner og – intratumoral immunterapi
Formålet med dette forsøket er å videreutvikle PCI-teknologien for bruk i mRNA-baserte vaksiner og intratumoral immunterapi. En av de viktigste barrierene for bruk av mRNA i vaksinering og terapi, er å få til en effektiv levering av mRNA til målcellene in vivo. I forbindelse med Covid-19 pandemien har det blitt utviklet effektive mRNA-baserte vaksiner hvor mRNA blir levert ved intramuskulær injeksjon av mRNA formulert i lipid nanopartikler (LNPer). Levering av mRNA til andre vev er imidlertid fremdeles lite effektivt. I tidligere forsøk har det blitt vist at PCI kan gi en kraftig forbedring av nakent mRNA til hud og til tumorer, og in vitro har det også blitt vist at PCI kan forbedre levering med flere type LNPer. Forsøkene planlagt i den foreliggende søknaden har to hovedmål: (i) å undersøke om PCI kan forbedre intramuskulær mRNA -levering og -vaksinering med nakent mRNA, og med mRNA formulert i LNPer; (ii) å bruke de samme leveringssystemene for mRNA-basert intratumoral immunterapi mot kreft. Under (ii) vil mRNAer som koder for antigener og immunstimulerende faktorer bli benyttet.
Prosjektet adresserer problemstillinger hvor effektive løsninger vil ha høy samfunnsmessig nytteverdi, og som også har stor vitenskapelig interesse.
Dyrene som blir brukt i studiene vil bli injisert, enten i lårmuskelen eller i tumor, med mRNA-molekyler som koder for rapportørprotein, vaksine-antigener eller immunstimulerende faktorer, og injeksjonsstedet vil bli belyst for å forbedre leveringen av mRNA til målcellene. I dyr hvor rapportørprotein-mRNA blir brukt, vil effekten bli analysert ved in vivo bio-luminiscence imaging eller ved et enzymatisk assay på tumorekstrakter. Effekten av vaksinering vil bli målt ved å analysere blodprøver for forekomst av antigenspesifikke immunceller ved flow cytometri.
Ved forsøk i tumormodeller vil i noen tilfeller også tumorveksten bli fulgt. Basert på erfaringer fra tidligere FOTS-forsøk forventes lave til moderate skadevirkninger på dyrene. Tumormodellene som skal brukes metastaserer ikke. Det er observert lokale inflammasjonsreaksjoner i vaksinasjonsområdet klinisk hos pasienter, men med de dosene av aktive stoffer som planlegges brukt forventer vi, basert på tidligere forsøk, ingen slike reaksjoner.
Vi ønsker å bruke totalt 705 mus (stamme: C57BL/6JRj). Kravene om 3R følges ved å bygge på tidligere erfaringer: For å kunne studere mRNA levering in vivo, den samlede immunresponsen ved en vaksinering og simulere betingelsene i menneske, er det nødvendig å gjøre forsøk i levende dyr. Et lite antall mus i hver gruppe blir brukt i initierende forsøk, og gruppene kan eventuelt bli utvidet ved behov. Dyrene blir lagt i anestesi under lysbehandlingen og blir tett overvåket under og etter behandling.
Vi ønsker å utvide protokollen fra 705 dyr til 1338 dyr. Utvidelsen omfatter inkludering av 633 BALB/cRj.
Prosjektet adresserer problemstillinger hvor effektive løsninger vil ha høy samfunnsmessig nytteverdi, og som også har stor vitenskapelig interesse.
Dyrene som blir brukt i studiene vil bli injisert, enten i lårmuskelen eller i tumor, med mRNA-molekyler som koder for rapportørprotein, vaksine-antigener eller immunstimulerende faktorer, og injeksjonsstedet vil bli belyst for å forbedre leveringen av mRNA til målcellene. I dyr hvor rapportørprotein-mRNA blir brukt, vil effekten bli analysert ved in vivo bio-luminiscence imaging eller ved et enzymatisk assay på tumorekstrakter. Effekten av vaksinering vil bli målt ved å analysere blodprøver for forekomst av antigenspesifikke immunceller ved flow cytometri.
Ved forsøk i tumormodeller vil i noen tilfeller også tumorveksten bli fulgt. Basert på erfaringer fra tidligere FOTS-forsøk forventes lave til moderate skadevirkninger på dyrene. Tumormodellene som skal brukes metastaserer ikke. Det er observert lokale inflammasjonsreaksjoner i vaksinasjonsområdet klinisk hos pasienter, men med de dosene av aktive stoffer som planlegges brukt forventer vi, basert på tidligere forsøk, ingen slike reaksjoner.
Vi ønsker å bruke totalt 705 mus (stamme: C57BL/6JRj). Kravene om 3R følges ved å bygge på tidligere erfaringer: For å kunne studere mRNA levering in vivo, den samlede immunresponsen ved en vaksinering og simulere betingelsene i menneske, er det nødvendig å gjøre forsøk i levende dyr. Et lite antall mus i hver gruppe blir brukt i initierende forsøk, og gruppene kan eventuelt bli utvidet ved behov. Dyrene blir lagt i anestesi under lysbehandlingen og blir tett overvåket under og etter behandling.
Vi ønsker å utvide protokollen fra 705 dyr til 1338 dyr. Utvidelsen omfatter inkludering av 633 BALB/cRj.