In vivo to-fotonmikroskopi av CSD i våkne mus
Dette er en videreføring med endring av FOTS 7118 som nå har gått ut på tid. Vi ønsker i dette prosjektet å studere dynamikken i intra- og ekstracellulære ioneforandringer under "cortical spreading depression" (CSD) i våkne hodefikserte mus. For å detektere forandringer i ionekonsentrasjoner vil vi benytte genetisk kodete sensorer levert ved hjelp av rekombinante adeno-assosierte virus. Forandringer i intracellulær kalsium detekteres ved hjelp av sensoren GCaMP6f, mens ekstracellulær glutamat detekteres ved hjelp av iGluSnFR. Variasjon i øvrige stoffer kan avdekkes med tilsvarende indikatorer. I tillegg vil vi studere hvordan glucosenivået påvirker ioneforandringene ved samtidig å utrykke glucosesensoren Sweetie med GCaMP6f eller iGluSnFR. For å forstå ulike mekanismers påvirkning av CSD-fenomenet, vil vi bruke ulike typer genmodifiserte mus hvor deler av antatte medvirkende mekanismer er genetisk skrudd av, eller alternativt aktivert eller deaktivert ved hjelp av optogenetiske teknikker.
Hva som skjer under en CSD-bølge er ikke kartlagt i detalj. Spesielt er det uklart hva som er sekvensen av hendelser ved bølgefronten. Vha moderne billedteknikker, virus-indikatorer og genmodifiserte mus vil vi gjennom dette eksperimentet kunne belyse underliggende mekanismer i patofysiologien til migreneaura, inklusive relasjonen mellom cellulære kalsiumsignaler og vaskulær dynamikk. På sikt kan kunnskapen prosjektet bringer gi nye angrepspunkter for behandling av migrene.
Fordi systemene vi forsker på i stor grad påvirkes av anestesi, er det vanskelig å bruke med alternative modellsystemer. Vårt laboratorie har flere års erfaring med teknikkene beskrevet her, spesifikt forsøk omfattet av FOTS 7118, og har optimalisert prosedyrene over tid med tanke på å bedre dyrevelferd. Våre forsøks gyldighet og verdi avhenger også av at dyrene har det bra, da sykdom eller stress må antas å påvirke resultatene negativt. Vi bruker så få dyr som mulig, erfarne kirurger, sikrer tilstrekkelig anestesi og analgesi.
Hva som skjer under en CSD-bølge er ikke kartlagt i detalj. Spesielt er det uklart hva som er sekvensen av hendelser ved bølgefronten. Vha moderne billedteknikker, virus-indikatorer og genmodifiserte mus vil vi gjennom dette eksperimentet kunne belyse underliggende mekanismer i patofysiologien til migreneaura, inklusive relasjonen mellom cellulære kalsiumsignaler og vaskulær dynamikk. På sikt kan kunnskapen prosjektet bringer gi nye angrepspunkter for behandling av migrene.
Fordi systemene vi forsker på i stor grad påvirkes av anestesi, er det vanskelig å bruke med alternative modellsystemer. Vårt laboratorie har flere års erfaring med teknikkene beskrevet her, spesifikt forsøk omfattet av FOTS 7118, og har optimalisert prosedyrene over tid med tanke på å bedre dyrevelferd. Våre forsøks gyldighet og verdi avhenger også av at dyrene har det bra, da sykdom eller stress må antas å påvirke resultatene negativt. Vi bruker så få dyr som mulig, erfarne kirurger, sikrer tilstrekkelig anestesi og analgesi.