Immunoterapi mot kreft ved bruk av humaniserte xenograft modeller
1 Formål
Caedo Oncology er et nystartet selskap som utvikler terapeutiske antistoffer mot kreft. Vårt første target er CD47 som er en immun checkpoint inhibitor som ofte er overuttrykt i kreftceller. Formålet med forsøket vårt er å etablere en in vivo xenograft modell av ulike humane krefttyper i NOD-scid IL2Rgammanull mus. Vi kommer til å følge kreftutviklingen ved in vivo bioluminesens billedtagning, og når modellen er etablert, starter vi behandling av kreften med vårt terapeutiske antistoff.
I leukemiske xenograftmodeller vil vi injisere kreftcellene i tibia (i.t.). I solide tumor xenograftmodeller injiseres cellene i suspensjon i matrigel. Oppdaterte scoringsskjemaer er vedlagt for å hensynta dyrevelferden hos de musene som er injisert intratibialt og subkutant.
2 Skadevirkninger
Vi har tidligere god erfaring med etablering av leukemiske xenograft-modeller. Musene har tålt dette godt, oppfører seg som normalt gjennom hele forsøket, og vi avliver innen de begynner å vise symptomer på kreften. I de solide tumorene, har vi opplevd at store tumorer kan sprekke og danne nekrotiske sår. Dette er et HE og musene vil avlives dersom dette skjer. Musene kommer til å få daglig tilsyn og alle dyr som viser tegn til lidelse utover et forhåndsbestemt humant endepunkt avlives.
3 Forventet nytteverdi
Våre in vitro studier har vist at vårt terapeutiske antistoff kan indusere celledød ved to forskjellige mekanismer:
1) Ved å blokkere et såkalt "don't eat me" signal som kreftcellene sender til immunceller for å unngå å bli drept av det medfødte immunforsvaret.
2) Ved å direkte indusere programmert celledød i en lang rekke humane kreftcellelinjer
Vi må nå teste potensialet til vårt fusjonsprotein CO-005 i en in vivo modell for å videre kunne undersøke dens potensiale til å bli et terapeutisk produkt som kan brukes i behandling hos kreftpasienter. Dersom antistoffet viser seg å være effektivt, kan vi redusere antallet behandlinger kreftpasienter har behov for fordi vårt antistoff angriper kreftceller via to mekanismer. Dette vil da forhåpentligvis redusere de alvorlige bivirkningene som er assosiert med kreftterapi.
4 Antall dyr og art
Tidligere erfaring har vist at transduksjonseffektivitet og etablering av kreftceller ("tumor take") kan variere innad i forsøk (Richartz et al., 2019, Blood Adv; Richartz et al., 2021, Mol Cancer Res). Vi søker derfor om godkjenning til å bruke inntil 10 mus per behandlingsgruppe. I endringssøknaden søker vi om å øke antallet omsøkte dyr med 1500.
5 Hvordan etterleve 3R
Reduction: Vi kommer ikke til å bruke mer dyr enn det som er nødvendig for å skaffe de nødvendige dataene som gir tilstrekkelig statistisk styrke.
Refinement: Kreftcellene blir før injeksjon i musene transdusert med en lentiviral vektor som koder for både enhanced green fluorescent protein (EGFP-til in vitro analyser) og firefly luciferase (fLuc- for in vivo bioluminesens imaging). Ved hjelp av disse markørene kan vi skånsomt følge utviklingen av kreften i musene uten å måtte ta stressende prøver eller avlive dyrene.
Replacement: Vi har allerede gjort grundige in vitro studier av vårt produkt, og må nå bevise dens effektivitet i en in vivo modell før vi kan gå videre til produksjon av et terapeutisk legemiddel for bruk i kliniske studier.
Caedo Oncology er et nystartet selskap som utvikler terapeutiske antistoffer mot kreft. Vårt første target er CD47 som er en immun checkpoint inhibitor som ofte er overuttrykt i kreftceller. Formålet med forsøket vårt er å etablere en in vivo xenograft modell av ulike humane krefttyper i NOD-scid IL2Rgammanull mus. Vi kommer til å følge kreftutviklingen ved in vivo bioluminesens billedtagning, og når modellen er etablert, starter vi behandling av kreften med vårt terapeutiske antistoff.
I leukemiske xenograftmodeller vil vi injisere kreftcellene i tibia (i.t.). I solide tumor xenograftmodeller injiseres cellene i suspensjon i matrigel. Oppdaterte scoringsskjemaer er vedlagt for å hensynta dyrevelferden hos de musene som er injisert intratibialt og subkutant.
2 Skadevirkninger
Vi har tidligere god erfaring med etablering av leukemiske xenograft-modeller. Musene har tålt dette godt, oppfører seg som normalt gjennom hele forsøket, og vi avliver innen de begynner å vise symptomer på kreften. I de solide tumorene, har vi opplevd at store tumorer kan sprekke og danne nekrotiske sår. Dette er et HE og musene vil avlives dersom dette skjer. Musene kommer til å få daglig tilsyn og alle dyr som viser tegn til lidelse utover et forhåndsbestemt humant endepunkt avlives.
3 Forventet nytteverdi
Våre in vitro studier har vist at vårt terapeutiske antistoff kan indusere celledød ved to forskjellige mekanismer:
1) Ved å blokkere et såkalt "don't eat me" signal som kreftcellene sender til immunceller for å unngå å bli drept av det medfødte immunforsvaret.
2) Ved å direkte indusere programmert celledød i en lang rekke humane kreftcellelinjer
Vi må nå teste potensialet til vårt fusjonsprotein CO-005 i en in vivo modell for å videre kunne undersøke dens potensiale til å bli et terapeutisk produkt som kan brukes i behandling hos kreftpasienter. Dersom antistoffet viser seg å være effektivt, kan vi redusere antallet behandlinger kreftpasienter har behov for fordi vårt antistoff angriper kreftceller via to mekanismer. Dette vil da forhåpentligvis redusere de alvorlige bivirkningene som er assosiert med kreftterapi.
4 Antall dyr og art
Tidligere erfaring har vist at transduksjonseffektivitet og etablering av kreftceller ("tumor take") kan variere innad i forsøk (Richartz et al., 2019, Blood Adv; Richartz et al., 2021, Mol Cancer Res). Vi søker derfor om godkjenning til å bruke inntil 10 mus per behandlingsgruppe. I endringssøknaden søker vi om å øke antallet omsøkte dyr med 1500.
5 Hvordan etterleve 3R
Reduction: Vi kommer ikke til å bruke mer dyr enn det som er nødvendig for å skaffe de nødvendige dataene som gir tilstrekkelig statistisk styrke.
Refinement: Kreftcellene blir før injeksjon i musene transdusert med en lentiviral vektor som koder for både enhanced green fluorescent protein (EGFP-til in vitro analyser) og firefly luciferase (fLuc- for in vivo bioluminesens imaging). Ved hjelp av disse markørene kan vi skånsomt følge utviklingen av kreften i musene uten å måtte ta stressende prøver eller avlive dyrene.
Replacement: Vi har allerede gjort grundige in vitro studier av vårt produkt, og må nå bevise dens effektivitet i en in vivo modell før vi kan gå videre til produksjon av et terapeutisk legemiddel for bruk i kliniske studier.